P. Quimicas P.N.

Pruebas para Flavonoides

1.1)Se colocan los pétalos blancos de flores a exposición con vapores de amoniaco. Alternativamente se suspende el polvo blanco o crema (residuo de un extracto sin solvente) sobre un poco de amoniaco acuoso.

Prueba positiva:
a) Flavonas y/o flavonoles viran a amarillo.

b) Chalconas y/o auronas viran a amarillo o rojo.

c) Antocianinas viran a rojo intenso.

1.2) Se disuelve un poco de la muestra en agua (o se usa extracto acuoso) y se le añade una solución de hidróxido de sodio acuoso.

Prueba positiva:

a) Flavonas y flavonoles viran a amarillo.

b) Isoflavonas viran a rojo.

c) Chalconas viran a púrpura rojizo.

d) Antocianinas viran a azul.
1.3) Se disuelve un poco de la muestra en etanol ( o se usa el extracto alcohólico). Se le añade un trocito de magnesio y unas pocas gotas de ácido clorhídrico concentrado.

Prueba positiva:

a) Flavonas viran a color naranja.

b) Flavonas viran a color rojo.

c) Flavonas viran a color rojo azulado.

1. Flavononoles o santonas viran a color violeta. Con Zn y HCl solo los flavononoles dan colores intensos.

1.4) Se disuelve un poco de la muestra en ácido sulfúrico concentrado:

Prueba positiva:

a) Flavononas viran a color naranja o guinda.
b) Chalconas y auronas viran a color guinda o rojo acuoso.

Pruebas para Sesquiterpenalctonas.

(Son dificiles de Saponificar)

2.1) La muestra se disuelve en etanol o éter etílico. Se añade una gota de solución 2N de clorhidrato de hidroxilamina en metanol y una gota de KOH 2N en metanol. La mezcla se calienta a ebullición (baño de agua) por 1-2 minutos. Se enfría y se acidula con HCl 0.5 N y se añade.
Prueba positiva: coloración violácea.
2.2) Prueba de Baljet.

a) Solución A: 1g de ácido pícrico en 100ml de etanol.

Solución B: 10g de hidróxido de sodio en 100ml de agua.
b) Las dos soluciones se mezclan en volúmenes iguales antes de usarse.
c) A 2-3 mg de la muestra se añaden 3-4 gotas del reactivo.

Prueba positiva:formación de color naranja o rojo oscuro.

Pruebas con Colimarinas

La mayoría de las colimarinas tienen fluorescencia azul cuando se les expone a la luz violeta.
3.1) Prueba de Emmersón

a) Solución A Na2CO3 al 0.5% en agua
b) Solución B 4-amino-antipirina al 0.9% en agua.
c) Solución C Ferrocianuro de potasio al 5.4% en agua.

“Se mezclan las 3 soluciones en volúmenes iguales y se agregan a la muestra disuelta en un poco de agua”.
Prueba positiva: aparición de color intenso(?)

3.2) Prueba con hidróxido de sodio.
Como las cumarinas son lactonas se pueden disolver en NaOH acuoso o alcohólico con aparición de una coloración amarilla, la cual desaparece al acidular con HCl.

Pruebas de Lignanos

Presenta reacciones para hidroxilos fenolicos. Se suspende la muestra en una solución de FeCl3 2.5% en etanol.

Pruebas de Esteroles

5.1) Prueba de Liberman – Burchard.
Se mezcla 1ml de anhidro acético y 1ml de CHCl3, se enfrían a 0ºC y se coloca una gota de H2SO4. Una porción de este reactivo se pone en contacto con la sustancia o su solución cloroformica.

Prueba positiva: aparición de coloración.
El orden de aparición de la coloración tiene cierto valor diagnostico (0,1,5,20,60 minutos)
5.2) Prueba de Rosenhaim.

A una solución cloroformica de la sustancia se pone en contacto con ácido tricloroacetico al 90% en agua.

Prueba positiva: Aparición de color violeta que cambia a azul si hay dienos nucleares.

Pruebas para Saponinas y Sapogeninas

6.1) Prueba de Liberman – Burchard.

6.2) Prueba de Salkowski.
Se añade a la muestra 2 – 3 gotas de CHCl3 y 2-3 gotas de ácido sulfúrico.

Prueba positiva: aparición de color café rojizo.

Pruebas para Carbohidratos

7.1) Prueba de Molish.

1-2 mg de glicosido se mezclan con 1-2 gotas de solución al 5% de a-naftol y por la pared del tubo se agrega H2SO4 concentrado.

Prueba positiva: Aparición de anillo violeta.

7.2) Prueba de Rosenthaler (también para saponinas). 1-2 mg de glicosido se mezclan con 1-2 gotas de vainillina al 1% en etanol y se añaden 1-2 gotas de HCl concentrado o H2SO4

Pruebas para Quininas
(r-benzoquinonas y 1,4-naftoquinonas)

8.1) 1-2 mg de la muestra se mezclan con 1-2 gotas de cianoacetato de etilo y 1-2 gotas de amoniaco acuoso.

Prueba positiva: aparición de color azul violeta.

Pruebas para Alcaloides

9.1) Reactivo de Mayer.

Se disuelven 136g de HgCl2 en 60ml de agua y 5g de Kl en 10ml de agua. Se juntan las dos soluciones y sé aforan a 100ml.
A una solución en agua o CH3OH de la muestra, previamente acidulada, con HCl o H2S04 se añaden unas gotas del reactivo.

Prueba positiva: aparición de precipitado.

9.2) Reactivo de Wagner.

Se disuelven 1.27g de yodo resublimado y 2g de Kl en 20ml de H2O. La solución se afora a 100ml con agua destilada. A una solución en agua o CH3OH de la muestra, previamente acidulada, con HCl o H2S04 se añaden unas gotas del reactivo.

Prueba positiva: aparición de precipitado.