Dr.Tux
Descripción General – (ROCHE)
¿Qué son Anticuerpos Monoclonales?
Los Anticuerpos Monoclonales son sustancias producidas en laboratorios, que reconocen y se unen a células blancos específicas (tal como una proteína) existentes en la superficie de una célula cancerígena.
Cada anticuerpo monoclonal, sólo reconoce una proteína ó antígeno, como objetivo y blanco, Pueden utilizarse solos, ó en combinación con quimioterapia ó como portadoras de sustancias tales como toxinas ó radiación.
Después de unirse a un sitio target, el anticuerpo monoclonal puede destruir las células tumorales ó estimular al sistema inmunológico a atacar el target y puede inclusive sensibilizar una célula oncológica a la quimioterapia. Esta acción, suele ocurrir tanto sí el anticuerpo es humanizado ó quimérico.
Un anticuerpo murino deriva únicamente de proteínas de ratón y por lo tanto puede ser recibida como un cuerpo extraño pudiendo ser rechazado
Un anticuerpo quimérico se refiere a que lo componen anticuerpos tanto humanos como murinos , generalmente en una proporción 70/30 por ciento, en donde los componentes murinos son los responsables para permitir la unión al antígeno y los componentes humanos están involucrados en inducir el efecto terapéutico.
Humanizado significa que el Anticuerpo Monoclonal, contiene un 90 por ciento de material humano.
Descripción detallada.-
¿Que son ?
Los anticuerpos que se producen al inocular un antígeno en una animal son en realidad una mezcla heterogénea de inmunoglobulinas, esto es, son anticuerpos policlonales. Las únicas inmunoglobulinas monoclonales naturales conocidas con las proteínas de mieloma, pero, aunque se ha encontrado que algunas proteinas de mieloma tienen alta afinidad por substancias tales como el dinitrofenol, la vitamina k o la fosforilcolina, para la gran mayoria de ellas se desconoce su especificidad y por lo tanto no se manejan como anticuerpos monoclonales.
No fue hasta que KÖhler y Milstein desarrollaron la tecnología de los hibridomas (1975) cuando se pudieron producir inmunoglobulinas monoclonales con actividad de anticuerpo (anticuerpos monoclonales). Aunque la tecnica se desarrollo inicialmente utilizando células de ratón, en la actualidad ya se ha podido producir hibridomas con células de varias otras especies, incluyendo al hombre.
La siguiente figura nos muestra los pasos a seguir para producir anticuerpos monoclonales.-
Monoclonales
1. La Hierinmunización de ratones con un antigeno seleccionado, la extracción de organos linfoides (bazo y ganglios linfaticos) y la preparacion de suspensiones celulares (enriquecidas en células productoras de anticuerpos).
2. La obtención de suspensiones de células de mieloma no secretoras de inmunoglobulinas y carentes de la enzima hipoxantina-guanina-fosforibosil transferasa (HGPRTneg).
3. La mezcla de las células linfoides (Lc) con las celulas de mieloma (M) y su fusion con polieilénglicol. El resultado de esta dusion es la formacion de 3 tipos de híbridos : linfocitos con linfocitos (Lc-Lc) , Células M con celulas M (M-M) y linfocitos con celulas M (Lc-M), estos ultimos tambien conocidos como hibridomas.
4. La selección de los hibridomas por cultivo de las cl’elulas en medio HAT (medio de cultivo con hipoxantina, aminopetrina, y timidina).
5. La identificación de los hibridomas productores de anticuerpo (por ELISA).
6. La clonación de los hibridomas seleccionados, su expansión, reclonación, mantenimiento y preservación.
La Fusión.-
La Técnica es relativamente simple y consiste básicamente en la fusión de las células linfoides productoras de anticuerpo con células productoras de anticuerpo con las células de mieloma (tumorales). Originalmente la fusión se inducía por infección con el virus sendai, pero actualmente se hace utilizando polietilén glicol. Mientras que las c’elulas productoras de anticuerpo deben tomarse de un animal hiperinmunizado, las c’elulas de mieloma deben tener al menos tres características:
- Deben ser histocompatibles con las células productoras de los anticuerpos.
- Deben ser no secretoras de inmunoglobulinas.
- Deben carecer de la enzima hipoxantina-guanina-fosforribosil transferasa (HGPRT).
Las células resultantes pueden ser híbridos de cualquier tipo: linfocitos con linfocitos (Lc-Lc), celulas de mieloma con celulas de mieloma (M-M) y linfocitos con celulas de mieloma (Lc-M), además de celulas no fusionadas. Los híbridos Lc-M son conocidos como hibridomas.
Hibridomas
El conjunto de hibridomas obtenido, una vez eliminados los linfocitos y las células tumorales no fusionadas entre sí, se diluye convenientemente, de modo que las alicuotas que se cultiven en los pocillos de una placa de Elisa no contengan más de una célula (hibridoma). La proliferación de cada hibridoma genera un clon de células que produce un mismo tipo de anticuerpo. Si el test de unión al antígeno de interés es positivo, el hibridoma es cultivado para su uso clínico.
Mantenimiento de los hibridomas.-
Los hibridomas productores de anticuerpo se expanden (se dejan proliferar en recipientes de mayor capacidad). y luego se recogen, se concentran por centrifugación, se suspenden en medio de cultivo suplementado con suero fetal de ternera y dimetil sulfoxido y finalmente se congelan, primero a 70 °C bajo cero y luego en nitrógeno liquido hasta su uso posterior.
Congelados los hibridomas pueden durar indefinidamente. Alternativamente los hibridomas se mantienen en cultivo en medios ricamente suplementados para la producción inmediata de anticuerpos o se inoculan en la cavidad abdominal de ratones histocompatibles donde proliferan como tumor de ascitis. Aparte de los componentes naturales del exudado peritoneal, el líquido de ascitis concentra altas cantidades de anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos se separan y purifican por métodos bioquimicos e inmunológicos convencionales.
Aunque son suceptibles de mutuar, los hibridomas mantienen sus caracteristicas morfológicas y fisiológicas durante muchas generaciones.
Usos.-
El uso de anticuerpos monoclonales ha permitido identificar y purificar una infinidad de antigenos celulares que de otra manera no se hubieran podido detectar: antígenos de diferenciación CD’s (CD1, CD”, CD3, CD4 etc..), receptores para antígenos y para citocinas, y las citocinas mismas, además de muchas otras moléculas.
En la actualidad, los anticuerpos monoclonales tienen amplia aplicación en investigación, como herramientas para identificar y aislar moléculas; en el laboratorio clínico, como herramientas de diagnóstico y, en la clínica, como vehículos de transporte de drogas y radioisótopos para el tratamiento del cáncer, por ejemplo.
Fuente:
Rojas Espinosa , Inmunologia de Memoria.
http://www.medmol.es/tecnica.cfm?id=12
